適用范圍：

不易獲得的生物樣本，被支原體污染了，但需要挽救，不能丟棄， 例如：不容易獲得的細胞種子。可采用支原體清除法。若是無法長期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液，則推薦使用德國MB公司的Mynox® ，處理3小時，直接殺除。Mynox 僅供研究使用。不適用于臨床治療。

使用方法：

1. 貼壁細胞系的處理

1.1細胞和除菌混合物的制備

1.1.1使用無菌的6厘米培養(yǎng)皿配制消菌液。

1.1.2加入2.8 ml含5% (v/v) FBS的標準細胞培養(yǎng)基。

1.1.3加入200µl Mynox®(1瓶)。

1.1.4在含有5% (v/v)FBS的細胞培養(yǎng)基中加入2ml新鮮胰蛋白酶化的10^4 – 10^5細胞。包括細胞在內(nèi)的處理液的總體積為5ml。注意:確保只處理單個細胞(在顯微鏡下檢查!)如有必要，增加胰蛋白酶處理的持續(xù)時間或通過上下移液機械分解細胞團塊。注意:先加入Mynox®，然后將細胞放入培養(yǎng)基中。將細胞直接加入除菌混合物培養(yǎng)基中(將吸管頭直接插入溶液中).

1.2 Mynox®的處理細胞

1.2.1在正常生長條件下，將細胞與除菌混合物保持一整個傳代周期(約6至8天)。然后，除去含有Mynox®的培養(yǎng)基，將細胞在標準培養(yǎng)基中傳代。

1.2.2.注意:如果細胞在8天后仍未達到融合，請停止處理，丟棄含有Mynox®的培養(yǎng)基，并添加新鮮的標準細胞培養(yǎng)基。注意:在處理過程中，應(yīng)經(jīng)常觀察細胞，檢查細胞毒性作用，如果明顯注意到，應(yīng)立即停止治療，更換培養(yǎng)基或用培養(yǎng)基1:5稀釋混合物。

2. 懸浮細胞系的處理

2.1細胞和除菌混合物的制備

2.1.1使用無菌離心管配制除菌混合物。

2.1.2加入1.6 ml 0.125%胰蛋白酶和5 mM EDTA。

2.1.3加入200µl Mynox®(1瓶)。

2.1.4將1.6 ml含有10% (v/v) FCS和10^4 – 10^5細胞的標準細胞培養(yǎng)基從懸浮細胞培養(yǎng)液中轉(zhuǎn)移到除菌混合物中。漩渦。包括細胞在內(nèi)的處理液的總體積為3.4 ml。注意:確保只處理單個細胞(在顯微鏡下檢查!)注意:首先加入Mynox®，然后將細胞放入培養(yǎng)基中。將細胞直接加入溶液中(將吸管頭直接插入消泡液中!)注意:在旋轉(zhuǎn)過程中，請確溶液濕潤離心機管的整個內(nèi)表面。

2.2 Mynox®的處理和去除

2.2.1 37℃孵育30分鐘。

2.2.2將細胞輕離心(600 × g) 5分鐘，丟棄上清。

2.2.3將細胞重懸于不含Mynox®的標準細胞培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)瓶中。為了獲得更有效的方法，可以在Mynox®存在下進行1代傳代培養(yǎng):

（1）將細胞重懸在含有5% (v/v) FBS和150µl Mynox®的5ml細胞培養(yǎng)基中。

（2）在正常生長條件下，將細胞在此培養(yǎng)基中培養(yǎng)3天。

（3）將細胞在無Mynox®生長培養(yǎng)基中傳代。

（4）注意:在治療過程中，應(yīng)經(jīng)常觀察細胞，檢查細胞毒性作用，如果明顯注意到，應(yīng)立即停止反應(yīng)，更換培養(yǎng)基或用培養(yǎng)基1:5稀釋混合物。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

Mynox® 是一種支原體去除劑，不含抗生素的制劑，通過誘導微生物死亡來消除支原體污染。它的活性基于生物物理機制，因此幾乎不會產(chǎn)生抗性菌株。

1.快速、有效。針對無法長期培養(yǎng)的珍貴樣本，使用Mynox®處理細胞3小時左右，即可祛除支原體。

2.不含抗生素，不會誘導支原體耐藥。